载体和目的基因分别经限制性酶切后,产生不同的3'突出粘性末端.设计实验方案,构建重组质粒.

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/06 06:04:31
载体和目的基因分别经限制性酶切后,产生不同的3'突出粘性末端.设计实验方案,构建重组质粒.

载体和目的基因分别经限制性酶切后,产生不同的3'突出粘性末端.设计实验方案,构建重组质粒.
载体和目的基因分别经限制性酶切后,产生不同的3'突出粘性末端.设计实验方案,构建重组质粒.

载体和目的基因分别经限制性酶切后,产生不同的3'突出粘性末端.设计实验方案,构建重组质粒.
方法非常多,列举一两个:
1.
不同的粘性末端不能相连.所以,如果要相连,就要去除不同的粘性末端,进行平末端相连.
粘末端变成平末端有两种方法:klenow酶的补平或者s1核酸酶的切平.
为了减少载体自连,可以用碱性磷酸酶处理载体.
最后将载体和目的基因链接,构建重组质粒.
2.
设计引物,自带酶切位点,扩增目的基因,直接改变目的基因的酶切位点,然后再用和载体相同的限制酶酶切目的基因,切出相同的粘性末端.
直接将酶切完成的目的基因和载体连接.

为什么末端不同?是使用了不同的酶切位点吗?是单酶切还是双酶切?目的基因中的酶切位点在载体中存在吗?

要去除不同的粘性末端,进行平末端相连。核酸酶的切平。
为了减少载体自连,可以用碱性磷酸酶处理载体。
最后将载体和目的基因链接,构建重组质粒。

同源重组法
可以在设计目的片段引物时,在5段加上载体末端15bp的同源序列

载体和目的基因分别经限制性酶切后,产生不同的3'突出粘性末端.设计实验方案,构建重组质粒. 49.右图为某种质粒表达载体简图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点,ampR为青霉素抗(3)在上述实验中,为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连 一般采用同一种限制性核酸内切酶分别处理质粒和含有目的基因的DNA 切割目的基因和载体为何必须用相同的限制性内切酶?只要目的基因和载体的黏性末端可以匹配上不同的限制性内切酶切割不是也可以吗?为什么卷子上说“必须用相同的限制性内切酶”? 目的基因和载体构成目的基因的表达载体一般除了目的基因外还要包括----------等结构. 目的基因经特定载体进行拼接重组DNA可能有:目的基因-目的基因 目的基因-载体 载体-载体目的基因与经页顶酶切后的载体进行拼接重组DNA可能有:目的基因-目的基因 目的基因-载体 载体-载 在基因工程中不会出现 A DNA连接酶将粘性么端的碱基连接起来 B限制性内切酶用于目的基因的获得C 目的基因须由载体导入授体细胞 D 人工合成目的基因不用限制性内切酶 目的基因和载体必须用同种限制酶还是只需要产生同种黏性末端即可? 为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,酶切的图示3,在上述实验中,为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,酶切时应选的酶是 ------- 怎样防止目的基因和载体的自连 构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和已经预先双酶切的目的载体连接,那么?先前的目的基因为什么不直接和目的载体相连呢?为什 标记基因和目的基因是连在一起的吗?如何用标记基因筛选目的基因载体? 用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗怎么筛选这种呢? 谁可以帮我分析一道生物题?主要是第二问,为什么接到四环素的那个连接产物没有目的基因--载体连接物?6.【海南卷】26、(18分)图为某种质粒表达载体简图,小箭头所指分别为限制性内切 是不是获取目的基因和切割载体时可以不用同种限制酶,只要产生的粘性末端和平末端相同即可? 基因工程中的碱基互补配对目的基因被限制性内切酶切为平末端后,构建载体时,是否进行碱基互补配对? 如何识别目的基因DNA和质粒DNA用同一种限制性核酸内切酶切过的目的基因DNA和质粒(载体)DNA,如何辨别他们呢?当然如果实际操作的话,肯定自己心里知道.可是作业上有这么一题,不明所以.小 基因工程中必需用同种限制性内切酶处理目的基因和运载体,这句话对吗?