作业帮蛋白质再跑SDS-PAGE时是分子量小的在下面,在过凝胶色谱时分子量小的最后流出来,这是为什么啊?这两个原理我都看了,一下就把我搞糊涂了!我想知道一个蛋白质加了糖链之后,分别经过SDS-PAGE,
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/09 11:04:56
蛋白质再跑SDS-PAGE时是分子量小的在下面,在过凝胶色谱时分子量小的最后流出来,这是为什么啊?这两个原理我都看了,一下就把我搞糊涂了!我想知道一个蛋白质加了糖链之后,分别经过SDS-PAGE,
蛋白质再跑SDS-PAGE时是分子量小的在下面,在过凝胶色谱时分子量小的最后流出来,这是为什么啊?
这两个原理我都看了,一下就把我搞糊涂了!我想知道一个蛋白质加了糖链之后,分别经过SDS-PAGE,跟凝胶色谱之后,跟原理的蛋白质的关系?
蛋白质再跑SDS-PAGE时是分子量小的在下面,在过凝胶色谱时分子量小的最后流出来,这是为什么啊?这两个原理我都看了,一下就把我搞糊涂了!我想知道一个蛋白质加了糖链之后,分别经过SDS-PAGE,
我觉得是和分子筛的孔径大小有关~~~ SDS-PAGE的孔径较大~~ 所以不管是什么分子量的都经孔径走~~ 所以最后大的蛋白被滞留在后面~~~ 而凝胶色谱的孔径较小~~~ 质量大的蛋白不经过孔径走而是从孔径的间隙走 路径就短了很多~~~ 所以大的先出来~~~
不知道是不是这么回事~~~~~~
凝胶色谱柱和SDS本质不同。
一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另...
全部展开
凝胶色谱柱和SDS本质不同。
一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出。至于多小的分子才能被凝胶颗粒阻碍是和分子筛的孔径有关。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，于连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。
此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷和分子形状无关。
收起