作业帮带HIS蛋白用镍柱纯化后的保存问题我的蛋白在纯化后放到-70度冰箱（未用液氮速冻）等第二天取出来时发现好多絮状沉淀,恢复到室温后也不能溶解,我认为是发生了蛋白变性.另外我需要的是
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/12 20:00:32
带HIS蛋白用镍柱纯化后的保存问题我的蛋白在纯化后放到-70度冰箱（未用液氮速冻）等第二天取出来时发现好多絮状沉淀,恢复到室温后也不能溶解,我认为是发生了蛋白变性.另外我需要的是
带HIS蛋白用镍柱纯化后的保存问题
我的蛋白在纯化后放到-70度冰箱（未用液氮速冻）等第二天取出来时发现好多絮状沉淀,恢复到室温后也不能溶解,我认为是发生了蛋白变性.另外我需要的是有活性的蛋白,保存时除了用液氮速冻外,还有什么办法能够最大限度的保证蛋白的活性呢?要去掉纯化洗脱用的咪唑吗,如果加甘油多大浓度的好呢?
带HIS蛋白用镍柱纯化后的保存问题我的蛋白在纯化后放到-70度冰箱（未用液氮速冻）等第二天取出来时发现好多絮状沉淀,恢复到室温后也不能溶解,我认为是发生了蛋白变性.另外我需要的是
蛋白保存是个比较棘手的问题,就我的理解来讲：
蛋白的保存很大程度上依赖于蛋白本身的结构稳定性,其次和保存条件优化有关；
尽量避免蛋白的反复冻融,这会对蛋白的结构和活性造成破坏；
像你说到的第二天就要用,根本没必要放在-70℃低温,一般来讲,尽量安排好实验周期,在3天内用完蛋白（4℃保存）是理想条件；
如果不得不保存,要分装,留下马上就用的放在4℃,其他放低温,每次取1只；如果有冻干机,冻成干粉再放到-70比液态低温更好,再溶解也会好很多（但很多蛋白还是会有失活问题）；
关于保护剂,如果蛋白稳定性不强,一般会加甘油（5%-50%浓度）和叠氮钠（抑菌）,这样一来,取出时,不得不做透析或脱盐,以去除甘油和叠氮钠,会带来损失,相比而言,冻干粉就好很多；
关于咪唑的去除问题,如果确信咪唑的存在对你后续的实验没影响,可以不去；但实际上,很多实验都会受到咪唑的影响,或者说一旦实验有疑问,你就无法判定是否是因为咪唑,所以建议你去咪唑,去咪唑的方式包括：透析、浓缩管离心、脱盐柱.个人认为,去除效率、最省时、蛋白回收率最高的办法是脱盐柱.
我目前想到的就这么多,欢迎继续讨论,祝实验顺利!