求助巢式PCR退火温度的设定我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢?

求助巢式PCR退火温度的设定我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢? PCR的退火温度怎么设定 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? ISSR-PCR引物的退火温度问题我做ISSR-PCR引物的退火温度能不能直接使用primer5.0这个软件计算得出的退火温度.理论上来说这是最佳的退火温度吗? 【跪求】我的PCR体系应该怎么设定?退火温度?我做一种真菌的pcr,引物序列左：aatcgacccgtttccgcctt, 右：gttagattgaccgcgattcc,生工合成单给的退火温度分别是59.85和57.8我的25微升体 关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? ISSR-PCR的退火温度怎么设计? PCR的退火温度怎么选择 [求助] PCR产物条带很淡最近做的PCR一直条带很淡,已经调了一些条件,还是没有效果. 目前是这样的：目的片段大约2.5kb,退火温度55度,从电泳的结果看来目的条带很整齐,也没有非特异性扩增, PCR反应的循环前和循环后的温度和时间做pcr除了必要的变性,退火,延伸的温度和时间,还需要在循环之前设定一个温度和时间,循环完成之后也要设定个温度和时间,最后还有个保存的时间,我想 ISSR－PCR退火温度如何设定有些引物说明书上的Tm值只有30～40度,通过公式2（A＋T）＋4（G＋C）－2计算的温度也只有30多度,我该如何设定退火温度? 在做RT-PCR时,或者是一般的PCR时,退火温度怎么设置,退火温度和Tm值之间有怎么样的关系? 铝合金的退火温度我从铝材市场买了一块厚0.5mm左右的铝板,想做板料的成形,可是现在的铝板塑性不是很好,想退火一下,怎么退火啊?设定多少温度?具体步骤是什么?这种退火的叫做什么退火,是 做pcr,如何确定最佳退火及延伸的时间和温度? 做荧光定量PCR和半定量PCR有什么区别?半定量的PCR退火温度和荧光定量PCR是一样的吗? pcr退火温度怎么确定? pcr退火温度怎么确定 PCR退火温度不稳定是什么原因?