实验设计:从大蒜中提取sod,如何测定sod的活性?一个实验设计,注意温度PH即可

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/29 07:05:58

实验设计:从大蒜中提取sod,如何测定sod的活性?一个实验设计,注意温度PH即可
实验设计:从大蒜中提取sod,如何测定sod的活性?
一个实验设计,注意温度PH即可

实验设计:从大蒜中提取sod,如何测定sod的活性?一个实验设计,注意温度PH即可
不知是不是大蒜中提取的有何影响.
在一般情况下,SOD酶活性测定只能应用间接活性测定法.多采用【邻苯三酚自氧化方法】.
邻苯三酚在碱性条件下,能迅速自氧化,释放出O2 -（氧的离子型态）,生成带色的中间产物,反应开始后反应液先变成黄棕色,几分钟后转绿,几小时后又转变成黄色,这是因为生成的中间物不断氧化的结果.这里测定的是邻苯三酚自氧化过程中的初始阶段,中间物的积累在滞留30～45s后,与时间成线性关系,一般线性时间维持在4min的范围内,中间物在420nm波长出有强烈光吸收.当有SOD存在时,由于它能催化O2 -与H+结合生成O2和H2O2,从而阻止了中间产物的积累,因此,通过计算即可求出SOD的酶活性.
另外
酶活力单位定义：在25℃恒温条件下,每毫升反应液中,每分钟抑制邻苯酚自氧化率达50%的酶量定义为1个酶活力单位.
1、邻苯三酚自氧化速率的测定
取两支试管按下表加入25℃预热过的缓冲液,然后加入预热过的邻苯三酚（空白管用10mmol/L HCl代替邻苯三酚）,迅速摇匀,立即倾入1cm比色杯中,在325nm波长处测定光吸收值,每隔30s读数一次,测定4min内每分钟光吸收值的变化.要求自氧化速率控制在每分钟的光吸收值为0.07（可增减邻苯三酚的加入量,以控制光吸收值）.
2、SOD样液的活性测定
样品管取代自氧化管.样品管测定时先加入预热的待测酶液,再加邻苯三酚.其余步骤同邻苯三酚自氧化速率的测定.
再计算即可.

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